TECNICAS MACROSCOPICAS COPRPPARASITOSCOPICAS "TAMIZADO"

 TECNICAS MACROSCOPICAS COPROPARASITOSCOPICAS 

"TAMIZADO"

Se fundamenta en el fenomeno de la filtracion, utilizando tamices de diferentes diametros en donde quedan atrapados los parasitos (trmatodos, cestodos, nematodos). Esta tecnica permite observar directamente las caracteristicas morfologicasde los parasitos adultos enteros o fraccionados de los metazoarios.

"MATERIAL Y EQUIPO"

1 Coladera de tamiz fino

1 Abatelenguas

1 Caja petri

1 Pinzas

"PROCEDIMIENTO"

1 Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2 Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado los mas limpio posible.

3 Revisar cuidadosamente las particulas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4 Los parasitos encontrados colocarlos en la caja petri con solucion salina.

5 Se identifica la parte del parasito o el parasito completo.

6 Se reporta en genero y la especie  del parasito o pare del parasito.

RESULTADOS:

En la muestra de heces del paciente no se encontraron parasitos que afecten al organismo del paciente y asi mismo ocasionarle un malestar estomacal aunque la muestra presentaba un estado liquido (diarrea) pudo ser ocacionado por haber ingerido alimento en mal estado.

"METODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS"

"INTRODUCCIÓN" 

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en prepara la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir  y adherirse a un cubreobjeto colocado en contacto con la superficie del liquido.

"MATERIAL"

1 vaso de precipitados 

1 Embudo                                                                 SOLUCIÓN SATURADA DE NaCL.

1 Gasa                                                                      SOLUCIÓN DE YODO-LUGOL.

1 Tubo de ensaye

1 Porta objetos 

1 Cubreobjetos 

"PROCEDIMIENTO"

1.- Tomar aprox. 1 gr de heces fecales con una abatelenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10 ml de solución saturada de Cloruro de Sodio.
3.- En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.
4.- Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.
5.- Esperar de 5 a 10 minutos.
6.- Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla.
7.- Colocar una gota de Yodo-Lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.
8.- Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40 X, buscado quistes o huevecillos de parasitos.
9.- Reportar sus resultados con imagenes.

COMENTARIO: Esta practica es una de las muchas que existen para la identificación  de parásitos o huevecillos que se encuentran en  las heces fecales en este caso en la muestra que se analizo se encontraron huevos de ascaris causantes de diarreas en el humano.

"METODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE"

FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación  mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y eter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permte el tranporte  y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una tecnica para la evaluacion de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL y EQUIPO

Centrifuga 

Tubos de ensaye cónicos de 15 ml                                   soluc. Salina isotonica

Gasa cortada en cuadros                                                 soluc. De formaldehido al 10% eter

Embudos de polietileno

Vasos de precipitado de 50 ml

Aplicadores de madera 

Pipetas Pasteur con bulbo

Porta objetos de 26 x 76 mm

Cubreobjetos de 22 x 22 mm

Microscopio

MÉTODO

a)Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. de materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml se solución salina y se homogeniza.

b) Se filtra la suspención a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el flitrado en el tubo cónico.

c) Se centrifuga la suspención durante 2 minutos a 2000 r.p.m

d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solucion salina centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más.

e) Al ultimo sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

f) Se añaden después 5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energeticamente durante 30 segundos.

g) Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 r.p.m.

h) Después de centrifugar se observan 2 capas:

-éter en la superficial 

-un tapon de restos fecales

-formaldehido

-sedimento en el fondo del tubo, contiendo los elementos parasitarios.

i) Se decanta el sobrenadante.

j) Se introduce la pipeta pasteur hasta el sedimento, se extiende con cuidado una gota del sedimento y se coloca en el portaobjetos.

k) Se le añade y¿una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriendolo con el mismo.

 l) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10x y 40x.

COMENTARIO: Esta practica nos sirvió para conocer distintos métodos de flotación de las heces para su  análisis completo y una obtención de resultados correctos de quistes y cocos que provocan distinta enfermedades al paciente.

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST" (BIS)

COMENTARIO: En esta practica se volvió a practicar el método de faust con el fin de reforzar cada vez mas los conocimientos y si mismo conocer mas acerca de lo que se puede encontrar en las heces fecales por mencionar algunas que a continuación se mencionan.

En este campo se puede apreciar que en esta muestra de heces se encontraron quistes y algunas fibras de comida no digeridas.




























En este campo se pueden observar: quietes pero de "ENTAMOEBA COLI",

Ademas de que se pudieron observar algunos tejidos conectivos.

  

PRACTICA No.2 "MÉTODO DE FLOTACIÓN DE FAUST"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST"

Este  método se utiliza en la solución de Zn cuya densidad especifica es de 1.180 (33%) que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Ascaris fertil 1.110 y facilita que lo huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución  se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.18. El agua utilizada diluye y lava la matería fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada pelicula la superficie del liquido centrifugado con los huesos livianos de algunos helmintos.


TÉCNICA:

1) Mezclar una porción de materia fecal para prepara una superficie en 10 partes de agua destilada.

2) Filtrar la suspención a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

3) Centrifugar el flitrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4) Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender  el sedimento.

5) Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.

6) Decantar nuevame

nte el liquido sobrenadante remplazandolo por igual cantidad de solución del sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7) Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta-objetos y mezclarlo con 1-2 del lugol, colocar cubre-objeto.

8) Examinar al microscopio y reportar sus resultados.


Método indicado para el diagnostico de huevos livianos de helmintos
(Necator, Tricocéfalos, Ascaris, H. nana).

COMENTARIO: Esta practica me sirvió para reforzar conocimientos acerca de diferentes parásitos que se encuentran dentro de las heces fecales y que algunas causan daños al huésped y otras son comensales las cuales no hacen ningún daño al huésped.

PRACTICA "C.P.S EN FRESCO"

"METODO C.P.S DIRECTO O EN FRESCO"
I.- INTRODUCCION:
Como sabemos uno de los primeros microscópicos  fue Antón Van Leewenhoek y a mediados del siglo XVII fue  el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lambia.
El método que necesita menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen  directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces fecales o no preservadas, el formol  sirve de diluyente. Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos como trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. El lugol se emplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas  con base a sus características
La mezcla normal en el tracto intestinal por  lo general no asegura una distribución uniforme de trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas  de nematodos. Sin embargo el examen de materia fecal directo o e fresco puede revelar  o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.
II.-FUNDAMENTO:
La solución salina isotónica  da las condiciones adecuadas para que la célula se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que pueda encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución  salina  fisiológica, y lugol   en la práctica  ha demostrado   su eficacia  para la tinción  e identificación de parásitos intestinales.
III.- MATERIAL

• Material fecal

• Aplicadores de madera

• Porta objetos de 25x76 mm.

• Cubre objetos

• Solución salina isotónica

• Lugol parasitológico

IV.-TECNICA
 

•          En un cubreobjetos colocar una gota de solución salina isotónica

•          Con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. De heces en muestras de moco y sangre elegir esta parte para estudiar.

•          Mezclar, procurando hacer una suspensión de fibras y otros fragmentos grandes.

•          Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar burbujas.

•          Examinar al microscopio en forma sistematica a seco débil  y a seco fuerte.

•       Repetir  la operación con una gota de lugol en lugar  de la solución salina.

F           "FORMA DE REPORTAR"Primero se escribe la fase o estadio enseguida del nombre del parasito, con el genérico iniciado con mayúscula  y el específico con minúsculas, subrayándolo o escribiendo con otro tipo de letra.
Por ejemplo:
Huevos de Áscaris Lumbricoides.        V.- VENTAJAS Y DESVENTAJAS                  A) VENTAJAS            ·         La sencillez y rapidez para llevar a cabo este método, además de la economía en su realización.·         Ambos tipos de montaje se pueden preparar con un mismo portaobjetos.
·         Este técnica es la más útil para encontrar trofozoitos  de amibas y flagelados.
·         Permite observar la inmovilidad  de los organismos, la cual con mucha frecuencia es caracterizada y sirva para hacer identificación exacta.
B) DESVENTAJAS
·         Las preparaciones con lugol pueden destruir las formas sensibles  como los trofozoitos.
 ·         La  muestra  utilizada  es tan pequeña  que es poca representativa.
VI.- PRECAUCIONES

•          Una preparación satisfactoria  debe  tener densidad ligeramente  opaca, pero se lo bastante  delgada que permita leer las letras  a través de esta.

•          Se deben  de ver perfectamente  los elementos en la preparación, sin  que se dificulte la observación por el exceso de burbujas  y detritos microscópicos.

•          El heces liquidas y semilíquidas hay que seleccionar  el moco sanguinolento  o los esfácelos  delgados del tejido  y en heces formadas, hacer  raspados para obtener materias de la superficie  en varias  partes de la masa fecal.

•          Utilizar lumínica baja.

•          Examinar por lo menos tres muestras  antes de considerar  negativos los resultados.

•          La materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se deberá tener  los cuidados necesarios  para su manejo.

            VII.- AUTOEVALUCIÓN
             
               ¿QUE ES LA SOLUCIÓN ISOTÓNICA?
La definición seria, sustancia con una concentración de  solidos igual a la concentracion interna de solidos de la célula, donde se aplique. Este es el concepto práctico.El concepto teórico, académico es el siguiente, isotonia, es un estado de equilibrio osmótico entre dos soluciones separadas por una membrana, o entre un organismo y su medio ambiente.Este concepto se usa mucho en la manufactura de colirios, porque la solución isotónica, no irrita el ojo, por ejemplo, para 0.3 gramos de ácido bórico, le agregamos 16.7 ml. de agua destilada, y la hacemos isotónica con el fluido lagrimal, o sea de igual concentración de sólidos, produciendo una sensación agradable al agregar el colirio o goteo en el ojo.Otro ejemplo es el cloruro de sodio en suero inyectado, debe ser al 0.9%.OBSERVACIONES
               Haga esquemas de sus observaciones, anotando lo siguiente:
               a) Género y especie del parásito
               b) Estado vital
               c) Aumento utilizado
               d) Estructuras observadas
                CONCLUSIÓN
           
            En esta práctica se pudieron observar diferentes microorganismos,                       aplicando diferentes soluciones, una de ellas es la solución   fisiológica                 esto con el fin de detectar  trofozoitos de Entamoeba histolitica, Giardia lambia y Blantidum coli.
         
             Aplicando solución de yodo lugol al frotis, esto permitirá la observación de quistes de protozoos o               huevos o larvas.
             Por último para  poder concluir la actividad se inactivaron muestras y los aplicadores con las que                       se mezclaron las heces se sometieron al fuego.
                            

BIBLIOGRAFIA

 
                           http://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070301194538AA68jvf

•               http://azzuliithaderiivera.blogspot.mx/                  

                    http://es.wikipedia.org/wiki/Isot%C3%B3nico