"DETERMINACION CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"

"DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"

PRINCIPIO DEL METODO

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en ciametahemoglobina.

la intensidad del color formado es proporcional a ka cincentracion de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLINICO

La hemoglobina es una proteina que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. se encuentra en los globulos rojos y es la encargada del tranporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.

Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cancer, embarazo,enfermedades renales o hemorragias.

Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatias deshidratacion o estancia en lugares de gran altitud.

El diagnostico clinico debe realizarse teniendon en cuenta todos los datos clinicos y de laboratorio.

REACTIVOS                Ferricianuro de potasio         0.60mmol/L

HEMOGLOBINA        Cianuro de potasio                77mmol/L

50X                                 Dihifrogeno fosfato de potasio 2mmol/L

MATERIAL ADICIONAL

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm
• Cubetas de 1.0 cm de paso de luz 
• Equipamiento habitual de laboratorio

MUESTRAS

Sangre apilar o venosa

Usar anticoagulantes como EDTA, heparina u oxalato 

Estabilidad de la muestra 1 semana a 2-8°C

PROCEDIMIENTO

1.-Condiciones de ensayo

Longitud de onda..........................540nm

Cubeta.........................................1cm paso de luz

Temperatura.................................15-25°C

2.- Ajustar el espectrofotometro a cero frente a agua destilada

3.- Pipetear  

A) METODO MACRO

                  BLANCO                 PATRÓN             MUESTRA

RT(ml)             5.0                            5.0                        5.0

Calibrador

(microL)           -                                2.0                         -

Muestra

(microL)           -                                 -                           2.0

B) METODO  MICRO

                   BLANCO                 PATRÓN            MUESTRA

RT(ml)             2.5                            2.5                        2.5

Calibrador

(microL)           -                                10                         -

Muestra

(microL)           -                                -                             10

4.- Mezclar e incubar 3 minutos as temperatura ambiente (15-25°C)

5.- Leer la absorbancia (A) de calibrador y la muestra, frente al Blanco  de reactivo

CALCULOS

• CON FACTOR

(A) Muestra X 36.77= g/dl de hemoglobina en la muestra

• CON PATRÓN

(A) Muestra   X 15(Conc. Patrón)=g/dl de hemoglobina  en la muestra

(A) Patrón

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES               14-18 g/dl= 8.7-11.2 mmol/L

MUJERES                 12-16 g/dl= 7.5-9.9  mmol/L

RESULTADOS

.353  X 15=  15.574 g/dl

.340

COMENTARIO

Por  medio de esta practica que se realizo se logro calcular la cantidad de hemoglobina que hay en la sangre del paciente y asi mismo valorarla y llegar a la conclusión que esta dentro de los valores de referencia  y se encuentra sano (a) el paciente.