"MÉTODO DE TUBO DE ENSAYE"

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios no.199

GRUPO SANGUÍNEO 

MÉTODO EN TUBO DE ENSAYE

TÉCNICA: Previa asepsia practicar venopuncion y recoger 1ml de sangre 

Depositar en un tubo de ensaye , 2ml  de sangre y 9.8ml de sol isotónica de NaCl al 0.9% par formar una suspención de eritrocitos al 2%.

Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A, B, Rh respectivamente depositar en el tubo "A" una gota de suero Anti-A en el tubo B una gota de suero Anti-B y en el tubo Rh una gota de suero Anti-D.

Añadir a cada tubo una gota de suspención de eritrocitos al 2% (preparadas con anterioridad)

Centrifugar a 1000 r.p.m durante un minuto.

Sacar los tubos e inmediatamente observar si existe aglutinación.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Si existe aglutinación en el tubo "A" la sangre es del tipo "A"

Si existe aglutinación en el tubo "B" la sangre es del tipo "B"

Si existe aglutinación en los tubos A y B la sangre el del tipo "AB"

Si no existe aglutinación en los tubos A y B la sangre es del tipo "O"

Si existe aglutinación en el tubo Rh la sangre sera factor Rh positivo

si no existe aglutinación en el tubo Rh la sangre sera factor Rh negativo

GRUPO 

SANGUÍNEO

ANTISUEROS

                   ANTI A                              ANTI B                              ANTI AB                      ANTI D

A            Aglutinación                          No  Aglutinación               Aglutinación               No  Aglutinación 

B           No Aglutinación                     Aglutinación                      Aglutinación               No  Aglutinación 

AB         Aglutinación                          Aglutinación                     Aglutinación               No   Aglutinación 

O            No  Aglutinación                   No  Aglutinación              No  Aglutinación        Aglutinación 

D            No Aglutinación                    No  Aglutinación              No  Aglutinación        Aglutinación 

CONCLUSIÓN 

Esta es una nueva forma en la que podemos saber el grupo sanguíneo del paciente pero empleando un material extra, llamada centrifuga que nos sirve para poder sedimentar las células sanguíneas en el tubo de ensaye esto con el fin de tener un resultado mas eficaz en la determinación de su grupo.

GRUPO SANGUÍNEO Y RH

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios No. 199

PRACTICA No4

GRUPO SANGUINEO Y Rh

DETERMINACIÓN DE AGLUTINOGENOS (TIPADO GLOBULAR)

Principio: En la membrana del glóbulos rojo existen complejos químicos llamados antígenos que representan los llamados  grupos o factores sanguíneos .

se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia llamada precursora, llamada sustancia H (humana). Sobre esta sustancia se adhieren carbohidratos en un orden determinado. Para la sangre de tipo de cero "O" se unen dos moléculas de glactosa, una de mucosa  y una de glucosamina.

sobre esta cadena puede adherirse una nueva molécula y se cambia el tipo, si es de glucosamina se tiene le grupo "A" y si es de glactosa se tiene el grupo "B". Si se unen ambas moléculas en diversa posición se tiene el grupo AB:

Los primero grupos sanguineos que se descubrieron  fueron los llamdos ABO, y actualmente se conocen muchos mas.

El sistema Rh es independiente del sistema ABO, pero igual de importante en la tipificación sanguinea.

hay antigenops presentes en los eritrocitos de casi todas las persona y se les llama Universales, otros antígenos se han concentrado en una sola familoia y se les llama personales.

la importancia de la determinación de los grupos sanguineos y rh en el laboratorio es en las transfisiones sanguineas y en la eritroblastosis fetal.

FACTOR Rh

OBJETIVO: El alumno determinara el grupo sanguineo y el factor Rh de una mestra sanguinea, utilizando los antisueros correspondientes y previa demostracion correctamente.

INTRODUCCIÓN: Los grupos sanguineos se han clasificado asi por poseer caracteristicas diferentes, estas caracteristicas son los antigenos (Aglutinogenos) y los anticuerpos (Aglutininas ) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las tranfusiones.

MATERIAL                                                                                            REACTIVOS

1 EQUIPO DE EXTRACCION SANGUINEA                                SUERO ANTI A

1 PLACA DE VIDRIO EXCAVADA                                               SUERO ANTI B

10 APLICADORES DE MADERA (PALILLOS)                             SUERO ANTI D

LANCETA ESTERIL                                                                        SOL. ISOTONICA

4 TUBOS DE ENSAYE 10 x 100                                                      DE NaCL AL 0.9%

GRADILLA

CENTRIFUGA

MÉTODO PARA PORTAOBJETOS O PLACA:

TÉCNICA: Se utiliza la punción cutánea por medio de la lanceta, se desecha la primera gota y se deposita 1 gota en cada una de la excavaciones de la placa en forma horizontal o marcar con letras A, B, y Rh, posteriormente se añade una gota de suero Anti A, Anti B, Anti D respectivamente.

Mezclar perfectamente con un hisopo (aplicador) cada preparacion (No contaminar las diferentes preparaciones).

Agitar suavemente la placa con movimientos circulares durante 30 segundos aproximadamente.

Leer el resultado (una aglutinación macroscopica indicara la reacción).

Anti A                     Anti B                                Anti D                El grupo sanguíneo y su factor sera:

  +                               -                                         +                          A Rh Positivo

  +                               -                                         -                           A Rh Negativo 

  -                                +                                        +                          B Rh Positivo

  -                               +                                         -                           B Rh Negativo

  +                              +                                         +                          AB Rh Positivo

  +                              +                                         -                           AB Rh Negativo

  -                               -                                         +                           O Rh Positivo

  -                               -                                         -                            O Rh Negativo

En donde (+) Existencia de aglutinación 

                (-) Ausencia de aglutinación

CONCLUSIÓN:

EN ESTA PRACTICA RETOMAMOS LOS CONOCIMIENTOS YA ADQUIRIDOS EN LA PRACTICA DE LA DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS, ASÍ MISMO HAY QUE TOMAR EN CUENTA QUE ESTO ES UNO DE LOS MUCHOS PASOS QUE SE REALIZAN PARA SABER SI UNA PERSONA ES COMPATIBLE CON  EL FIN DE REALIZAR UNA TRANSFUSIÓN SAGUINEA. 

"RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS"

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 199

MIXQUIAHUALA, HGO.

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

INTRODUCCIÓN

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de globulos blancos que se observan en frotis teñido de sangre .

al conocer la proporcion de la celulas sanguineas que estan presentes en el torrente sanguineo cualquier transtorno patologico que altere el sistema hematopoyetico podria verse reflejado en un cambio de la proporcion de una especie celular. Para el recuento diferencial si tienes que observar un minimo de 100 leucocitos.

Hay varios metodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es en de almena en linea.

MATERIAL Y REACTIVOS

1. Frotis sanguíneo teñido

2. Microscopio

3. Aceite de inmersión

4. Un contador de células 

PROCEDIMIENTO

1. Se coloca el frotis en el microscopio y se enfoca

2. Se le agrega una gota de aceite  de inmersión y se observa con el objetivo de 100X

3. Si el recuento se hace en linea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en linea paralela hasta contar 100 leucocitos.

4. Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y polimorfonucleares (neutrofilos, eosinofilos y basofilos) según  su morfología.

5. Se reporta en % (valor relativo) en valor absoluto (mm3).

VALORES DE REFERENCIA

                                                  ADULTOS                                                 NIÑOS

LINFOCITOS                          20-55%                                                       20-50%

MONOCITOS                         2-6%                                                            0-9%

EOSINOFILOS                       1-5%                                                            0-8%

BASOFILOS                            0-1%                                                           0-1%

NEUTROFILOS                      45-70%                                                       20-60%

BANDAS                                  0-5 %                                                          1-6%

CONCLUSIÓN

CON ESTA PRACTICA SE PUDO IDENTIFICAR LA CANTIDAD QUE HAY DE LOS DISTINTOS TIPOS DE GLOBULOS BLANCOS EN LA SANGRE ESTO CON EL FIN DE DIAGNOSTICAR ALGUNA ENFERMEDAD QUE ALTERE EL FUNCIONAMIENTO DEL ORGANISMO TOMANDO COMO VALORES DE REFERENCIA LOS RESULATADOS ANTERIORMENTE MENCIONADOS.

"CONTEO DE LEUCOCITOS"

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL

 Y DE SERVICIOS No. 199

MIXQUIAHUALA, HGO.

PRACTICA No. 1

"CONTEO DE LEUCOCITOS"

INTRODUCCIÓN 

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematologia diagnostica. Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de snagre con el liquido de Turk, que es una silucion hipotonica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una camara de Neubauer y se cuenta el numero de celulas en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS

1. Pipeta de thoma para globulos blancos.

2.  Una cámara de Neubauer.

3.  Un microscopio. 

4. Solución de Turk

5. Gasas.

6. Sangre venosa con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectame.

2. Aspirar sangre con la pipeta de thoma hasta la marca 0.5

3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4. Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11.

5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.

6. Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 min y preparar la camara con el cubrehematimetro.

7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la camara por capilaridad por uno de los bordes del cubirhematimetro, sin que se formen burbijas o sobrepasen los canales de la camara.
8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la camara con la muestra.
9. Enfocar la camara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco debil en 64 cuadros de las cuatro cuadriculas de los extremos.
10. Multiplicar el numero de leucocitos contados por 50.

RESULTADOS

1er                           2da                                3er                            4ta

cuadricula               cuadricula                     cuadricula                 cuadricula

2                              2                                      1                                 4

3                              4                                      2                                 5

2                              2                                      4                                 3

2                              2                                      3                                 1

1                              3                                      2                                 2

2                              1                                      2                                 2

1                              1                                      1                                 1

3                              2                                      2                                 3

2                              3                                      3                                 2

2                              2                                      4                                 1

4                              3                                      1                                 1

3                              1                                      2                                 2

2                              2                                      3                                 3 

1                              3                                      2                                 2

3                              3                                      2                                 2

5                              2                                      3                                 1

PARA EL CONTEO DE LOS LEUCOCITOS NOS APOYAMOS DE LAS CUADRICULAS DE LAS ESQUINAS DE LA CÁMARA DE NEUBAUER (SEÑALADAS CON LA LETRA   "L" )

la suma de las cuatro cuadriculas dio como resultado 146
multiplicado por 50 
146X50= 7300 leucocitos/mm3.
CONCLUSIÓN:
En esta practica se realizo en recuento de leucocitos apoyandonos de diferentes materiales entre ellas una camara de neubauer que sirvio para poder contar los leucocitos, tomando en cuenta el resultado llegamos a la conclusión de que el paciente al que se le tomo la muestra sus leucocitos se encuentran en una buena cantidad que la misma entra dentro del valor de referencia.

VALOR DE REFERENCIA

5000 A 10000/mm3

"RETICULOCITOS"

"RETICULOCITOS"

Practica # 5

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos 

INTRODUCCION: Los reticulocitos son eritrocitos jovenes y continen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahi su nombre) mediante un colorante supravital 

cuando la medula osea aumenta la eritropoyesis aumenta tambien el numero de reticulocitos que salen hacia la circulacion.

"MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO"

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno
• Tubos de ensaye
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con tubo
• Baño maria
• Microscopio
• Aceite de inmersión

"PROCEDIMIENTO"

1. Mezclar la muestra sanguinea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta pasteur y mezclar.
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 minutos en el baño maria.
4. Mezaclar la suspencion y realizar un frotis en portaobjetos.
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersion y observar con el objetivo de 100X.
6. Buscar celulas que presenten una red con coloración azul (reticulocitos) Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el umero de reticulocitos observados.

RESULTADO: Numero de reticulocitos observados X 100

                         Numero total de eritrocitos

APLICANDO LA OPERACIÓN ANTERIOR DIO COMO RESULTADO 

1er MUESTRA:   .5%

 

2da MUESTRA:  .7%

CONCLUSIÓN: Con esta practica llegamos a la identificación de eritrocitos jovenes (reticulositos) y asi mismo saber las causas y el porque del origen de las anemias en diferentes situaciones que afectan a la salud del paciente, tomando en cuenta que los resultados mostrados anteriormente estan dentro de los valores de referencia.

                                            VALORES DE REFERENCIA

                                            ADULTOS:               0.5-2.0%

                                        RECIÉN NACIDOS:    2.5-6.5%   

"INDICES ERITROCITARIOS"

INDICES ERITROCITARIOS

(VALORES ABSOLUTOS)

Incluyen el volumen corpuscular (eritrocitica o globular ), 1 medio como la hemoglobina corpuscular (eritrocitica o globular media) y la concentración de hemoglobina corpuscular ( eritrocitica o globular) media que son valores dados normalmente como "valores absolutos".

1.- Se realizo el recuento de eritrocitos empleando una cámara de neubauer, contando solo 5 cuadros de la cuadricula de en medio de la misma especificadas a continuación: 

Obteniendo como resultados:

Cuadricula superior izquierda: 80 eritrocitos        Cuadricula superior derecha:  78

Cuadricula inferior izquierda: 57               Cuadricula inferior derecha:  89

Cuadricula  del centro:  91   

80+78+57+89+91=3950000 (nota se le agregan 4 ceros)

2.- Se realizo determinación de hemoglobina: Utilizando el espectrofotometro y celdillas para poder operarlo y determinar los deseado.

Obteniendo como resultado:

Abs de la muestra: 0.376

Abs del patron: 0.363

Abs de la muestra  X 15(concen. Patron)= gr/dl de hemoglobina de la muestra

Abs del patron

0.376 X 15=37.6 gr/dl.

0.363

3.- Se realizo hematocrito para la determinacion de estos valores absolutos.

Obteniendo como resultado:

46%

VALORES ABSOLUTOS

H.C.M.

Hb gr/dl=            154=   39.48 pg       Hb:37.6

N° eritrocitos       3.9                          Hb15.5 gr/dl

C.H.C.M.

Hb gr/dl  x 100 = 1540= 35.4%        Hto=43.5 %

valor de Hb           43.5                     wintrobe:   46%

V.C.C.M°3.

Valor Hto x 10= 435= 111.54 °3

N° eritrocitos      3.9

COMENTARIO: Con esta practica se nos llevo al repaso y verificación de tres practicas de mucha importancia que con ellas llegamos a la determinación de los valores absolutos de los indices eritrocitatrios totales.

"HEMATOCRITO"

"HEMATOCRITO"

INTRODUCCIÓN: El hematocritoel el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra de sanguinea y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un metodo sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por 2 metodos

1.- MACROMETODO (WINTROBE)

2.- MICROMETODO

MATERIAL Y REACTIVOS

Tubo de wintrobe                       sangre venosa

Tubo capilar

Plastilina

Centrifuga

Microcentrifuga 

Pipeta pasteur tallo largo

Equipo para veno punción 

Lector para hematocrito o regla.

TECNICA (MACROMETODO)

1.- Mezclar la muestra sanguinea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.

2.- El tubo se llana hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3000 rpm.

3.- Se efectua la lectura.

TECNICA (MICROMETODO)

1.-  Mezclar la muestra sanguinea  adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta tre cuartas partes.

2.- El extremo vacio que no estuvo en contacto con la sangre se cella con plastilina o a calor.

3.- El tubo con la muestra sanguinea se coloca en la microcentrifuga a 10000rpm durante 10 minutos.

4.- Leer  el porcentaje de hematocrito  en el lector o medirlo con una regla.

COMENTARIO:

Esdta practica nos sirvio para poder diagnosticar una anemia o plicitemia que llega a ser causada por la ausencia de eritrocitos, cabe mencionar que estos dos metodos son los mas eficaces para la detección de estas enfermedades.