"RETICULOCITOS"

"RETICULOCITOS"

Practica # 5

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos 

INTRODUCCION: Los reticulocitos son eritrocitos jovenes y continen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahi su nombre) mediante un colorante supravital 

cuando la medula osea aumenta la eritropoyesis aumenta tambien el numero de reticulocitos que salen hacia la circulacion.

"MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO"

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno
• Tubos de ensaye
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con tubo
• Baño maria
• Microscopio
• Aceite de inmersión

"PROCEDIMIENTO"

1. Mezclar la muestra sanguinea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta pasteur y mezclar.
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 minutos en el baño maria.
4. Mezaclar la suspencion y realizar un frotis en portaobjetos.
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersion y observar con el objetivo de 100X.
6. Buscar celulas que presenten una red con coloración azul (reticulocitos) Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el umero de reticulocitos observados.

RESULTADO: Numero de reticulocitos observados X 100

                         Numero total de eritrocitos

APLICANDO LA OPERACIÓN ANTERIOR DIO COMO RESULTADO 

1er MUESTRA:   .5%

 

2da MUESTRA:  .7%

CONCLUSIÓN: Con esta practica llegamos a la identificación de eritrocitos jovenes (reticulositos) y asi mismo saber las causas y el porque del origen de las anemias en diferentes situaciones que afectan a la salud del paciente, tomando en cuenta que los resultados mostrados anteriormente estan dentro de los valores de referencia.

                                            VALORES DE REFERENCIA

                                            ADULTOS:               0.5-2.0%

                                        RECIÉN NACIDOS:    2.5-6.5%   

"INDICES ERITROCITARIOS"

INDICES ERITROCITARIOS

(VALORES ABSOLUTOS)

Incluyen el volumen corpuscular (eritrocitica o globular ), 1 medio como la hemoglobina corpuscular (eritrocitica o globular media) y la concentración de hemoglobina corpuscular ( eritrocitica o globular) media que son valores dados normalmente como "valores absolutos".

1.- Se realizo el recuento de eritrocitos empleando una cámara de neubauer, contando solo 5 cuadros de la cuadricula de en medio de la misma especificadas a continuación: 

Obteniendo como resultados:

Cuadricula superior izquierda: 80 eritrocitos        Cuadricula superior derecha:  78

Cuadricula inferior izquierda: 57               Cuadricula inferior derecha:  89

Cuadricula  del centro:  91   

80+78+57+89+91=3950000 (nota se le agregan 4 ceros)

2.- Se realizo determinación de hemoglobina: Utilizando el espectrofotometro y celdillas para poder operarlo y determinar los deseado.

Obteniendo como resultado:

Abs de la muestra: 0.376

Abs del patron: 0.363

Abs de la muestra  X 15(concen. Patron)= gr/dl de hemoglobina de la muestra

Abs del patron

0.376 X 15=37.6 gr/dl.

0.363

3.- Se realizo hematocrito para la determinacion de estos valores absolutos.

Obteniendo como resultado:

46%

VALORES ABSOLUTOS

H.C.M.

Hb gr/dl=            154=   39.48 pg       Hb:37.6

N° eritrocitos       3.9                          Hb15.5 gr/dl

C.H.C.M.

Hb gr/dl  x 100 = 1540= 35.4%        Hto=43.5 %

valor de Hb           43.5                     wintrobe:   46%

V.C.C.M°3.

Valor Hto x 10= 435= 111.54 °3

N° eritrocitos      3.9

COMENTARIO: Con esta practica se nos llevo al repaso y verificación de tres practicas de mucha importancia que con ellas llegamos a la determinación de los valores absolutos de los indices eritrocitatrios totales.

"HEMATOCRITO"

"HEMATOCRITO"

INTRODUCCIÓN: El hematocritoel el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra de sanguinea y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un metodo sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por 2 metodos

1.- MACROMETODO (WINTROBE)

2.- MICROMETODO

MATERIAL Y REACTIVOS

Tubo de wintrobe                       sangre venosa

Tubo capilar

Plastilina

Centrifuga

Microcentrifuga 

Pipeta pasteur tallo largo

Equipo para veno punción 

Lector para hematocrito o regla.

TECNICA (MACROMETODO)

1.- Mezclar la muestra sanguinea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.

2.- El tubo se llana hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3000 rpm.

3.- Se efectua la lectura.

TECNICA (MICROMETODO)

1.-  Mezclar la muestra sanguinea  adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta tre cuartas partes.

2.- El extremo vacio que no estuvo en contacto con la sangre se cella con plastilina o a calor.

3.- El tubo con la muestra sanguinea se coloca en la microcentrifuga a 10000rpm durante 10 minutos.

4.- Leer  el porcentaje de hematocrito  en el lector o medirlo con una regla.

COMENTARIO:

Esdta practica nos sirvio para poder diagnosticar una anemia o plicitemia que llega a ser causada por la ausencia de eritrocitos, cabe mencionar que estos dos metodos son los mas eficaces para la detección de estas enfermedades.

"DETERMINACION CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"

"DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"

PRINCIPIO DEL METODO

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en ciametahemoglobina.

la intensidad del color formado es proporcional a ka cincentracion de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLINICO

La hemoglobina es una proteina que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. se encuentra en los globulos rojos y es la encargada del tranporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.

Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cancer, embarazo,enfermedades renales o hemorragias.

Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatias deshidratacion o estancia en lugares de gran altitud.

El diagnostico clinico debe realizarse teniendon en cuenta todos los datos clinicos y de laboratorio.

REACTIVOS                Ferricianuro de potasio         0.60mmol/L

HEMOGLOBINA        Cianuro de potasio                77mmol/L

50X                                 Dihifrogeno fosfato de potasio 2mmol/L

MATERIAL ADICIONAL

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm
• Cubetas de 1.0 cm de paso de luz 
• Equipamiento habitual de laboratorio

MUESTRAS

Sangre apilar o venosa

Usar anticoagulantes como EDTA, heparina u oxalato 

Estabilidad de la muestra 1 semana a 2-8°C

PROCEDIMIENTO

1.-Condiciones de ensayo

Longitud de onda..........................540nm

Cubeta.........................................1cm paso de luz

Temperatura.................................15-25°C

2.- Ajustar el espectrofotometro a cero frente a agua destilada

3.- Pipetear  

A) METODO MACRO

                  BLANCO                 PATRÓN             MUESTRA

RT(ml)             5.0                            5.0                        5.0

Calibrador

(microL)           -                                2.0                         -

Muestra

(microL)           -                                 -                           2.0

B) METODO  MICRO

                   BLANCO                 PATRÓN            MUESTRA

RT(ml)             2.5                            2.5                        2.5

Calibrador

(microL)           -                                10                         -

Muestra

(microL)           -                                -                             10

4.- Mezclar e incubar 3 minutos as temperatura ambiente (15-25°C)

5.- Leer la absorbancia (A) de calibrador y la muestra, frente al Blanco  de reactivo

CALCULOS

• CON FACTOR

(A) Muestra X 36.77= g/dl de hemoglobina en la muestra

• CON PATRÓN

(A) Muestra   X 15(Conc. Patrón)=g/dl de hemoglobina  en la muestra

(A) Patrón

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES               14-18 g/dl= 8.7-11.2 mmol/L

MUJERES                 12-16 g/dl= 7.5-9.9  mmol/L

RESULTADOS

.353  X 15=  15.574 g/dl

.340

COMENTARIO

Por  medio de esta practica que se realizo se logro calcular la cantidad de hemoglobina que hay en la sangre del paciente y asi mismo valorarla y llegar a la conclusión que esta dentro de los valores de referencia  y se encuentra sano (a) el paciente.

TECNICAS MACROSCOPICAS COPRPPARASITOSCOPICAS "TAMIZADO"

 TECNICAS MACROSCOPICAS COPROPARASITOSCOPICAS 

"TAMIZADO"

Se fundamenta en el fenomeno de la filtracion, utilizando tamices de diferentes diametros en donde quedan atrapados los parasitos (trmatodos, cestodos, nematodos). Esta tecnica permite observar directamente las caracteristicas morfologicasde los parasitos adultos enteros o fraccionados de los metazoarios.

"MATERIAL Y EQUIPO"

1 Coladera de tamiz fino

1 Abatelenguas

1 Caja petri

1 Pinzas

"PROCEDIMIENTO"

1 Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2 Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado los mas limpio posible.

3 Revisar cuidadosamente las particulas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4 Los parasitos encontrados colocarlos en la caja petri con solucion salina.

5 Se identifica la parte del parasito o el parasito completo.

6 Se reporta en genero y la especie  del parasito o pare del parasito.

RESULTADOS:

En la muestra de heces del paciente no se encontraron parasitos que afecten al organismo del paciente y asi mismo ocasionarle un malestar estomacal aunque la muestra presentaba un estado liquido (diarrea) pudo ser ocacionado por haber ingerido alimento en mal estado.

"METODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS"

"INTRODUCCIÓN" 

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en prepara la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir  y adherirse a un cubreobjeto colocado en contacto con la superficie del liquido.

"MATERIAL"

1 vaso de precipitados 

1 Embudo                                                                 SOLUCIÓN SATURADA DE NaCL.

1 Gasa                                                                      SOLUCIÓN DE YODO-LUGOL.

1 Tubo de ensaye

1 Porta objetos 

1 Cubreobjetos 

"PROCEDIMIENTO"

1.- Tomar aprox. 1 gr de heces fecales con una abatelenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10 ml de solución saturada de Cloruro de Sodio.
3.- En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.
4.- Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.
5.- Esperar de 5 a 10 minutos.
6.- Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla.
7.- Colocar una gota de Yodo-Lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.
8.- Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40 X, buscado quistes o huevecillos de parasitos.
9.- Reportar sus resultados con imagenes.

COMENTARIO: Esta practica es una de las muchas que existen para la identificación  de parásitos o huevecillos que se encuentran en  las heces fecales en este caso en la muestra que se analizo se encontraron huevos de ascaris causantes de diarreas en el humano.

"METODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE"

"MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE"

FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación  mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y eter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permte el tranporte  y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una tecnica para la evaluacion de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL y EQUIPO

Centrifuga 

Tubos de ensaye cónicos de 15 ml                                   soluc. Salina isotonica

Gasa cortada en cuadros                                                 soluc. De formaldehido al 10% eter

Embudos de polietileno

Vasos de precipitado de 50 ml

Aplicadores de madera 

Pipetas Pasteur con bulbo

Porta objetos de 26 x 76 mm

Cubreobjetos de 22 x 22 mm

Microscopio

MÉTODO

a)Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. de materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml se solución salina y se homogeniza.

b) Se filtra la suspención a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el flitrado en el tubo cónico.

c) Se centrifuga la suspención durante 2 minutos a 2000 r.p.m

d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solucion salina centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más.

e) Al ultimo sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

f) Se añaden después 5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energeticamente durante 30 segundos.

g) Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 r.p.m.

h) Después de centrifugar se observan 2 capas:

-éter en la superficial 

-un tapon de restos fecales

-formaldehido

-sedimento en el fondo del tubo, contiendo los elementos parasitarios.

i) Se decanta el sobrenadante.

j) Se introduce la pipeta pasteur hasta el sedimento, se extiende con cuidado una gota del sedimento y se coloca en el portaobjetos.

k) Se le añade y¿una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriendolo con el mismo.

 l) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10x y 40x.

COMENTARIO: Esta practica nos sirvió para conocer distintos métodos de flotación de las heces para su  análisis completo y una obtención de resultados correctos de quistes y cocos que provocan distinta enfermedades al paciente.